بیان فاکتور رونویسی دوپامینرژیکی nurr۱ در سلول‏های انسانی به‏وسیله لنتی ویروس‏های نوترکیب

Authors

موسی گردانه

دانشگاه آزاد اسلامی، آمل، واحد آیت اله آملی، گروه زیست شناسی، آمل، ایران عباس رحیمی شم آبادی

دانشجوی کارشناسی ارشد زیست شناسی سلولی- مولکولی، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری عمران اسماعیل زاده

کارشناس ارشد ژنتیک، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری

abstract

هدف: هدف این تحقیق تولید  لنتی ویروس‏های حامل ژن nurr1 و بیان در سلول‏های انسانی می‏باشد. مواد و روش‏ها: قطعه ژنی ires-egfp با آنزیم‏های bgl ll/not1 از ناقل pires2-egfp جدا و با klenow کور (blunt) گردید. ناقل لنتی ویروسی  pnl-egfp/cmv/wpredu3 با آنزیم‏های nhe1/ xho1 برش و دو سر آن  کور شد.  قطعه ژنی ایزوله شده به این ناقل منتقل شد تا سازه لنتی ویروسی (i) به‏وجود آید. سپس ژن nurr1  با آنزیم‏های xho1 و bamh1 از ناقل pcmx-not بریده و درون پلاسمید (i) خطی شده باsal1 و bamh1 منتقل شد تا سازه نهایی لنتی ویروسی (ii) تولید گردد. برای تولید لنتی ویروس‏های نوترکیب، رده سلول انسانی hek-293t  را با این پلاسمید نهایی، به‏همراه پلاسمیدهای غشایی و بسته بندی لنتی ویروس ترانسفکت شد. محیط این سلول‏ها که مملو از ذرات ویروسی شده بود جمع آوری و از ستون آمیکون عبور داده شد تا ذخیره غلیظ ویروس به‏دست آید. این ذخیره برای آلوده سازی سلول‏های هدف استفاده شد. بیان egfp در زیر میکروسکوپ به اثبات رسید و بیان ژن nurr1 با rt-pcr سنجیده شد. نتایج: درستی مراحل کلونینگ با آنزیم‏های مربوطه اثبات شد. با میکروسکوپ فلورسنس بیان enhanced green fluorescent protein (egfp) در هر دو مرحله ترانسفکشن و ترانسدوکشن ثابت گردید. تکنیک rt-pcr بیان nurr1 را در هردو مرحله به اثبات رسانید. نتیجه گیری: لنتی ویروس‏های ناقل ژن انسانی nurr1 تولید شده و به‏دنبال آلوده سازی سلول‏های انسانی hek-293t با ویروس‏های مزبور، سلولهای فوق ژن nurr1 را به‏طور موفقیت آمیز بیان کردند.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

بیان فاکتور رونویسی دوپامینرژیکی Nurr1 در سلول‏های انسانی به‏وسیله لنتی ویروس‏های نوترکیب

هدف: هدف این تحقیق تولید  لنتی ویروس‏های حامل ژن Nurr1 و بیان در سلول‏های انسانی می‏باشد. مواد و روش‏ها: قطعه ژنی IRES-EGFP با آنزیم‏های Bgl ll/Not1 از ناقل pIRES2-EGFP جدا و با Klenow کور (Blunt) گردید. ناقل لنتی ویروسی  pNL-EGFP/CMV/WPREdU3 با آنزیم‏های Nhe1/ Xho1 برش و دو سر آن  کور شد.  قطعه ژنی ایزوله شده به این ناقل منتقل شد تا سازه لنتی ویروسی (I) به‏وج...

full text

ساخت لنتی ویروسهای نوترکیب ناقل ژن gdnf و بیان آن در سلولهای انسانی

بیماری پارکینسون دومین بیماری شایع در بین بیماری های زوال نورونی در اکثرکشورهای جهان است که حدود 1% جمعیت بالای 65 سال را گرفتار می کند. دلیل اصلی به وجود آمدن این بیماری تخریب پیش رونده نورون های دوپامین ساز در ناحیه substantia nigra pars compacta (snpc) در مغز میانی می باشد زیرا این سلول ها دوپامین می سازند و دوپامین یک نوروترانسمیتر شیمیایی است که سیگنال ها را به ناحیه striatumو سپس به نواحی...

15 صفحه اول

تولید لنتی ویروسهای نوترکیب ناقل ژن فاکتور نوروتروفیک gdnf با تیتر بالا و انتقال آنها به آستروسیتهای انسانی

لنتی ویروسها از جمله موثرترین ویروسهای نوترکیب برای انتقال ژن به سلولها و بافتهای پستانداران بشمار میرود. این مطالعه شامل دو بخش اساسی است: (1) بررسی کارائی ستونهای پروتئینی در تولید لنتی ویروسهای نوترکیب با تیتر بالا و (2) بکارگیری این ستونها درتولید لنتی ویروسهای نوترکیب حامل ژن فاکتورنوروتروفیک gdnf. در بخش اول مطالعه با استفاده از دو ناقل انتقال (حامل gfp یا jred) تولید لنتی ویروس نوترکیب ک...

full text

انتقال ژن به سلولهای کبدی رده lmh جوجه بوسیله لنتی ویروسهای نوترکیب

لنتی ویروسها از جمله موثرترین ویروسهای نوترکیب برای انتقال ژن به سلولها و بافتهای پستانداران بشمار میرود. در این مطالعه، عملکرد لنتی ویروسهای انسانی را در انتقال ژن خارجی به سلولهای طیور بررسی کردیم. سه ناقل لنتی ویروسی بنامهای ناقل انتقال (ناقل ترانسفر حامل ژن گزارشگر gfp)، ناقل بسته بندی و ناقل غشائی را همزمان به سلولهای مولد ویروس (رده hek-293t) منتقل کردیم. سوپرناتان سلولهای ترانسفکت شده را...

full text

بیان مینی ژنهای فاکتور 9 انعقادی انسانی در سلولهای کلیه انسان

Background & aims: Hemophilia B is caused by either functional deficiency or lack of the human coagulation factor IX (hFIX). The current protein-based therapy with plasma-derived proteins increases, the risk of blood-borne pathogens transmission. Therefore, replacement therapy with recombinant hFIX (rhFIX) is an attractive alternative to plasma derived hFIX concentrates. In order to express and...

full text

جداسازی، کلونینگ و بیان ژن فاکتور VII انعقادی نوترکیب انسانی در رده سلولی CHO

جداسازی، کلونینگ و بیان ژن فاکتور VII انعقادی نوترکیب انسانی در رده سلولی CHO راحله حلبیان1، ناصر شاگردی اسماعیلی2، آرزو اوودی2، ناصر مسروری3، دکتر ناصر امیری‌زاده4، دکتر کامران موسوی حسینی5، دکتر احمد قره‌باغیان6، دکتر حوری رضوان7، دکتر محمد علی جلیلی8، دکتر مهریار حبیبی رودکنار9 چکیده سابقه و هدف فاکتور VII ، یک گلیکوپروتئین پلاسمایی است که در آبشار انعقادی تشکیل فیبرین، شرکت دارد....

full text

My Resources

Save resource for easier access later


Journal title:
سلول و بافت

جلد ۷، شماره ۱، صفحات ۱-۷

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023